Ląstelių kultūros eksperimentuose pipetės naudojamos labai dažnai, o jų veikimo tikslumas daro tiesioginį poveikį eksperimentinių rezultatų patikimumui ir pakartojamumui. Toliau pateikiami keli patarimai, kaip pipetės eksploatuoti ląstelių kultūroje, kurie, tikiuosi, bus naudingi jūsų eksperimentui.
1. Pasirinkite tinkamą pipetę ir galiuką
- Pipetės pasirinkimas: Pasirinkite tinkamą pipetę pagal perkelto skysčio tūrį. Normalus daugumos pipetų veikimo tūrio diapazonas yra 10-100% nurodyto diapazono. Stenkitės išvengti pipetės tūrio iki mažiau nei 10% maksimalaus tūrio ir naudokite mažo diapazono pipetę mažų tūrio pipetams.
- Patarimo pasirinkimas: Pasirinkite antgalis, kuris atitinka pipetę, ir įsitikinkite, kad antgalis yra sandariai įkištas, kad būtų išvengta oro nutekėjimo. Be to, konkrečiems eksperimentams (tokiems kaip aseptinė operacija) turėtų būti pasirinkti autoklavuoti patarimai.
2. Nuplaukite galiuką
Nuplaukite patarimą 2-3 laikais, kad antgalis suformuotumėte homogenišką plėvelę, taip pagerindami pipetės tikslumą. Be to, jis gali neutralizuoti kapiliarų efektą mikropipetėse, dėl kurių galiuko temperatūra gali būti atitikta mėginio temperatūrai didelio tūrio pipetėms. Reikėtų pažymėti, kad skalavimas gali turėti neigiamos įtakos rezultatams, kai pipetuojant karštus ir šaltus sprendimus.
3. Kontroliuokite aspiracijos ir išdavimo greitį
- Sklandus paspaudimas: sklandžiai ir nuolat atleiskite valdymo mygtuką, užuot staiga paspausdami ir išleisdami. Tai gali išvengti burbuliukų susidarymo ir pagerinti pipetės tikslumą.
- Pauzė: Įspūdžio skystį, palikite galiuką skystyje maždaug 1 sekundę, ypač tiems klampiems skysčiams. Iškart ištraukus galiuką, skysčio aspiracija gali būti neišsamus.
4. Atkreipkite dėmesį į galiuko panardinimo gylį
- „Micropipette“: patarimas turėtų būti panardintas 2-3 mm.
- Didelio diapazono pipetė: panardinimo gylis turėtų būti 5-6 mm. Jei galas panardinamas per giliai, oras viduje esančiame galiuko viduje bus suspaustas, todėl norint išsiurbti per daug skysčio. Skystis, likęs ant galiuko paviršiaus, taip pat gali paveikti rezultatus.
5. Vertikalus operacija
Pipetę į mėginį panardinkite kiek įmanoma vertikaliai, geriausia, nesukeldami nuo vertikalios padėties daugiau nei 20 laipsnių. Be to, kad pagerina pipetės tūrio tikslumą, tai taip pat gali užkirsti kelią skysčiui tekėti į pipetę dėl per didelio pakreipimo.
6. Stebėkite pipetės galiuką
Ruošdamiesi išleisti skystį, atkreipkite dėmesį į tai, ar prie pipetės galiuko paviršiaus yra perteklinių lašelių. Išleidus skystį, pipetės galiuko galiuką galima paliesti į konteinerio pusę, kad būtų užtikrinta, jog išleidimas yra pakankamai kruopštus, kad paskutinį skysčio lašą liktų likusių pipetės galiuko galiuko.
7. Pasirinkite tinkamą pipetavimo metodą
- Teigiamas siurbimo metodas: tinkamas daugumai skysčių. Įsiurbdami skystį, paspauskite mygtuką į pirmąjį sustojimo tašką, tada lėtai atleiskite mygtuką, kad grįžtumėte į pradžios tašką. Tada paspauskite mygtuką iki pirmojo sustojimo taško, kad išleistumėte skystį, kurį laiką pristabdykite ir toliau paspauskite mygtuką į antrą sustojimo tašką, kad išpūstumėte likusį skystį. Pagaliau atleiskite mygtuką.
- Atgal siurbimo metodas: tinkamas labai klampiems skysčiams, biologiškai aktyviems skysčiams, lengvai putojantiems skysčiams ar ypač mažam skysčių kiekiui. Pirmiausia čiulpite daugiau skysčio nei nustatytas diapazonas ir, perkeldami skystį, neišpūskite likusio skysčio.
8. Laikykite pipetę švarią ir prižiūrimą
- Reguliarus kalibravimas: Tam tikrą laiką naudojant pipetę, ją reikia kalibruoti, kad būtų užtikrintas jos tikslumas.
- Valymas: Po kiekvieno naudojimo pipetė turėtų būti laiku išvalyta, kad likę skysčiai būtų išvengta užteršimo kito eksperimento.
9. Aseptinė operacija
Ląstelių kultūroje aseptinė operacija yra labai svarbi. Naudodami pipetę atkreipkite dėmesį į šiuos taškus:
- Dezinfekavimas: Prieš naudojimą, nuvalykite pipetę ir galiuką alkoholio medvilnės rutuliu dezinfekavimui.
- Venkite kryžminio užteršimo: Kiekvienam mėginiui naudokite naują patarimą, kad išvengtumėte kryžminio užteršimo.
Naudodami aukščiau pateiktus patarimus, galite tiksliau ir efektyviau naudoti pipetes ląstelių kultūros eksperimentams ir pagerinti eksperimentinių rezultatų patikimumą ir pakartojamumą. Tikiuosi, kad šie patarimai jums padės!